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Als behandelbaren Wunden


Kind code of ref document: Ref legal event code: Country of ref document: Date of ref document: Year of fee payment: Die Erfindung betrifft neue in vitro kultivierbare Keratinozyten sowie deren vorteilhafte Verwendung zur Herstellung als behandelbaren Wunden Erzeugnisses, welches zur Behandlung von akuten und chronischen Wunden verwendet werden kann. Wunden, die sich gegenüber herkömmlichen Therapien über einen lange Zeitraum therapieresistent zeigen, lassen sich unter Verwendung von allogenen Keratinozyten sehr oft als behandelbaren Wunden therapieren Phillips and Gilchrest, ; Beele et al.

Zu Beginn war das Augenmerk bei der Verwendung allogener Keratinozyten vornehmlich auf den Hautersatz, d. Es zeigte sich jedoch als behandelbaren Wunden, dass der Therapieerfolg primär auf der Stimulation der körpereigenen Reepithelisierung beruht und nicht auf einem"Anwachsen" des allogenen Zelltransplantats als behandelbaren Wunden der Wunde.

Zahlreiche Untersuchungen ergaben letztlich, dass die transplantierten Keratinozyten nur eine bestimmte Zeit in der Wunde verbleiben und dann von dem Körper klinisch nicht sichtbar eliminiert werden Kawai et al. Die Stimulation der körpereigenen Wundheilung erfolgt also primär über eine räumlich und zeitlich optimale Freisetzung von einer Vielzahl an unterschiedlichen Wachstumsfaktoren, Zytokinen, Alternative Medizin von Krampfadern Matrix ECMkleineren Als behandelbaren Wunden und Proteasen durch die allogenen Keratinozyten Lang et al.

Die Komplexität und Vielzahl der freigesetzten Faktoren begründet hierbei den therapeutischen Vorteil gegenüber herkömmlichen Einzeltherapien, z. Neben dem Haupteffekt der Reepithelisierung treten durch Behandlung mit Keratinozyten aber auch makroskopisch und mikroskopisch nachweisbare Veränderungen im Granulationsgewebe auf Lang et al.

Ein weiterer, für den Patienten wohltuender als behandelbaren Wunden oft beschriebener Effekt der Keratinozyten betrifft die als behandelbaren Wunden Analgesie nach Transplantation Schönfeld et al. Mit Ausnahme der Stammzellen verlieren undifferenzierte Keratinozyten in vivo ihr Proliferationspotential im Zuge der natürlicher Ausdifferenzierung bereits nach wenigen Zellteilungen, ein Prozess der bei als behandelbaren Wunden in vitro Kultivierung von Keratinozyten bisher immer beobachtet wurde Barrandon and Green, Folglich lassen sich die bisher für die Als behandelbaren Wunden besonders als behandelbaren Wunden teilungsaktiven Keratinozyten nur endlich in vitro kultivieren, was ihre medizinische Verwendung aufwendig und kostenintensiv macht.

Letzteres hat den Vorteil, dass die Zellen nicht enzymatisch vorbehandelt werden müssen, indem sie vor ihrer Verwendung vom Untergrund der Kulturschale abgelöst werden. Darüber hinaus ermöglicht die Verwendung von biokompatibler Membranen als Träger zur Kultivierung der Keratinozyten EP 0US 5, ; US 5, ; EP eine zeitlich frühere Fertigstellung der biologisch aktiven Wundheilverbände, da die Zellen keinen geschlossen Zellverband mehr ausbilden müssen.

Es lassen sich bereits subkonfluent bewachsene Träger zur Wundbehandlung einsetzten. Neben einer früheren Verfügbarkeit hat die Verwendung subkonfluenter Als behandelbaren Wunden zusätzlich den Vorteil, dass entsprechend kultivierte Keratinozyten weniger stark ausdifferenziert sind und somit die vorteilhaft für Behandlung von Wunden sind.

Keratinozyten lassen sich ohne nachteiligen Effekt für die Wundheilung direkt oder in Verbindung mit biokompatiblen Trägermaterialien bei Temperaturen zwischen und als behandelbaren Wunden C, bevorzugt jedoch zwischen als behandelbaren Wunden C kryokonservieren De Luca et al. Dies hat ihre therapeutische Nutzbarkeit weiter verbessert, da sich biologisch aktive Wundheilverbände im gewissen Umfang auf Vorrat herstellen lassen.

Ein offensichtlicher Nachteil der bisher bekannten Keratinozyten primären Ursprungs besteht darin, dass sich die besagten Zellen durch in vitro Zellkulturverfahren nur wenige Zellgenerationen verdoppeln lassen ohne dabei ihre hohe Teilungsaktivität als behandelbaren Wunden somit ihre bevorzugte Eignung zur Herstellung biologisch aktiver Als behandelbaren Wunden zu verlieren. Nach dem Stand der Technik ist es dem Fachmann lediglich möglich die Zahl der Zellen mittels in vitro Kultivierung um etwa das bis fache zu vermehren Tanczos et al.

Ein weiterer, hierdurch bedingter Nachteil besteht darin, dass die begrenzte in vitro Kultivierbarkeit der besagten Als behandelbaren Wunden eine häufige als behandelbaren Wunden aufwändige Neuisolierung erforderlich macht ; was wiederum zur Folge hat, dass das gewonnene und vermehrt Zellmaterial nicht einheitlich ist und somit die hieraus hergestellten Wundheilverbände mit hoher Wahrscheinlichkeit Qualitätsunterschiede aufweisen oder zumindest aufweisen können.

Ein weiterer Nachteil besteht darin, dass mit der Neuisolierung der Keratinozyten aus verschiedenen Spendern ein erhöhte Infektionsrisiko für den Empfänger des Wundheilverbandes besteht. Beschreibung der Als behandelbaren Wunden Gegenstand der Erfindung sind Keratinozyten mit hohem Proliferationspotential, die nicht immortalisiert sind und die Pest von Thrombophlebitis mindestens als behandelbaren Wunden durch in vitro Zellkulturverfahren verdoppeln lassen.

Hieraus resultiert eine Zellvermehrung um ungefähr das fache. Die entsprechenden Keratinozyten behalten hierbei ihre vorteilhaften Eigenschaften für die Behandlung von Wunden. Die Erfindung betrifft bevorzugt Keratinozyten, die aus dem epidermalen Als behandelbaren Wunden einer Vorhaut isoliert werden.

Budapester Vertrag hinterlegt sind. Vorteilhaft für die Kultivierung ist die Verwendung des in Beispiel 1 angegebenen komplexen Mediums sowie die Verwendung von Feeder-Zellen engl. Ammenzellenbevorzugt die Verwendung von letal bestrahlten murinen 3T3 Fibroblasten. Die Herstellung der Feeder-Zellen ist dem Fachmann bekannt, und kann z.

Mit dem unter Beispiel 1 dargestellten Verfahren beträgt die Verdopplungszeit der Keratinozyten, insbesondere die humaner Keratinozyten aus dem epidermalen Anteil einer Vorhaut, zwischen 1 und 2 Tagen Abbildung 1. Die Zellen lassen sich hierbei über zahlreiche Passagen mit annähernd konstanter Verdopplungsrate kultivieren Abbildung 2. Die vorliegenden Erfindung ist hierbei allerdings nicht allein auf die Keratinozyten KC-BI-1 beschränkt, vielmehr ist es für einen Fachmann möglich, die Erfindung unter entsprechenden Bedingungen mit allen Keratinozyten gemäss der Ansprüche auszuführen.

Letzteres meint, dass die Zellen weder unter Verwendung von als behandelbaren Wunden. Keratinozyten, die"nicht immortalisiert sind"meint auch, dass die besagten Keratinozyten im Vergleich zu transformierten Tumorzellinien Härle-Bachor and Boukamp, oder im Vergleich zu immortalisierten Zellienen, bevorzugt zu der Zellinie HeLa keine als behandelbaren Wunden eine wesentliche geringere Telomeraseaktivität aufweist Vgl.

Dies gilt insbesondere auch im Vergleich zu der immortalisierten Keratinozytenzellinie Als behandelbaren Wunden. Der Ausdruck"nicht immortalisiert"meint aber auch, dass die besagten Keratinozyten ihren charakteristischen Phänotyp here mit zunehmender Zellverdopplung verändern Vgl. Die Erfindung betrifft ferner Keratinozyten, die als behandelbaren Wunden immortalisiert sind und sich mindestens mal durch als behandelbaren Wunden vitro Zellkulturverfahren verdoppeln lassen.

Die Erfindung betrifft darüber hinaus auch solche Keratinozyten, die nicht immortalisiert sind und sich mindestens mal durch in vitro Zellkulturverfahren verdoppeln lassen. Die vorliegende Click the following article ermöglicht die vorteilhafte Vermehrung als behandelbaren Wunden besagten Keratinozyten ausgehend von nur einem oder wenigen Spendern.

Ausgehend von einer Spende lassen sich beispielsweise nach Zellverdopplungennach Zellverdopplungen und nach Zellverdopplungen Zellen herstellen. Dadurch ermöglicht die Erfindung erstmals die Bereitstellung grosser Mengen an standardisiertem Zellmaterial für die Herstellung von biologisch aktiven Wundheilverbänden mit gleichbleibender und kontrollierbarer Qualität.

Eine als behandelbaren Wunden Menge an standardisiertem Zellmaterial lässt sich z. Mit der Als behandelbaren Wunden von standardisiertem Als behandelbaren Wunden als Ausgangsmaterial für die Herstellung von biologisch aktiven Wundheilverbänden wird auch das Infektionsrisiko als behandelbaren Wunden Troxerutin mit kleinen Becken möglichen Empfänger verringert, da die Isolierung der Keratinozyten auf wenige Spender, vorzugsweise auf einen Als behandelbaren Wunden, beschränkt bleibt.

Damit überwindet die vorliegende See more wesentliche Nachteile, die zur Zeit in der lediglich eingeschränkten Passagierbarkeit der bisher bekannten Keratinozyten besteht. Gegenstand der Erfindung ist darüber hinaus ein Erzeugnis, learn more here aus einem Träger besteht, der mit den erfindungsgemässen Keratinozyten beschichtet ist.

Ein partiell bewachsener Träger ist besonders geeignet, da eine kürzere Kultivierungszeit benötigt wird bis der besagte Träger zur Wundbehandlung verwendet werden kann.

Es können aber auch Trägermaterialien mit vorwiegend hydrophilem Eigenschaften verwendet werden. Als behandelbaren Wunden bevorzugte Ausführung der vorliegenden Erfindung besteht in als behandelbaren Wunden Verwendung von Trägermaterialien die aus einem Polymer aus veresterter Hyaluronsäure bestehen.

Bei einer besonders bevorzugten Ausführung handelt es sich um ein Polymer aus veresterter Hyaluronsäure, bestehend aus einer perforierten Polymerfolie mit definierter Geometrie. Die Polymerfolie hat hierbei beispielweise eine Dicke von 10 bis um und ist mit Löchern mit einer Grösse zwischen 10 und um durchlöchert, wobei die Löcher eine definierte und konstante Grösse haben und eine geordnete Reihe bilden, worin sie durch einen konstanten Abstand von 50 bis jim voneinander.

Eine entsprechende Folie ist in'EP 0 beschrieben. Perforierte Trägermaterialien eignen sich besonders gut, da sie kein gerichtetes Auflegen des biologisch aktiven Wundverbandes auf die Wunde erfordern. In Beispiel 3 wird die beispielhafte Herstellung einer mit den erfindungsgemässen Keratinozyten bewachsenen perforierten Trägermatrix aus veresterter Hyaluronsäure mit definierter Als behandelbaren Wunden beschrieben.

Die besonders bevorzugte Eignung dieses Trägermaterials zur Herstellung eines biologisch als behandelbaren Wunden Wundverbandes in Kombination mit Keratinozyten wurde bereits am Tiermodell Lam et al. Neben einer verbesserten Migration und Ausdifferenzierung der epithelialen Zellen hat die aus Hyaluronsäureester bestehende Matrix als behandelbaren Wunden positiven Effekt auf die Angiogenese und die Kollagenproduktion.

Für sie gelten somit die oben als behandelbaren Wunden Nachteile aus dem Stand der Technik. Dieser Nachteil kann insbesondere durch die Als behandelbaren Wunden der vorteilhaften erfindungsgemässen allogenen Keratinozyten überwunden werden.

Die besagten Polymere als behandelbaren Wunden dabei sowohl perforiert als auch unperforiert. Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls ein Verfahren zur Kryokonservierung der erfindungsgemässen Keratinozyten bei einer Temperatur von C bis C, bevorzugt bei Stehen Säule mit Temperatur unter C.

Die besagten Keratinozyten lassen sich nach standardisierten und einem dem Fachmann geläufigen Verfahren einfrieren. Als Kryoprotektant lässt sich u. Darüber hinaus ist auch die Verwendung anderer Kryoprotektanten möglich, wie etwa Glycerol, Hydroxyethylstärke oder eine Kombination aus diesen beiden sowie eine Kombination dieser mit DMSO.

Entsprechende Verfahren sind beispielhaft: Gegenstand der vorliegenden Erfindung source auch die Als behandelbaren Wunden der mit den erfindungsgemässen Keratinozyten beschichteten Träger, dadurch gekennzeichnet dass, die Keratinozyten mit entsprechenden Träger bei einer Temperatur von C bis C, bevorzugt bei C bis C kryokonserviert werden.

Die Kryokonservierung hat den Vorteil, dass das in grossen Mengen herstellbare Erzeugnis gelagert werden und somit vor seiner medizinischen Verwendung stichprobenartig auf als behandelbaren Wunden einheitliche Qualität untersucht werden kann. Die Lagerung ermöglicht letztendlich auch dass die besagten Wundheiverbände kurzfristig für medizinische Zwecke verfügbar sind. Ferner ist read article die Verwendung von Trehalose als Kryoprotektant möglich.

Es ist aber auch möglich, dass andere Als behandelbaren Wunden zur Kryokonservierung angewendet werden, z. Bei den behandelbaren Verbrennungen handelt es sich bevorzugt um Verbrennungen zweiten Grades, bei den Geschwüren bevorzugt um chronische schlecht heilenden Unterschenkelgeschwüre des Typs Ulcus cruris, bevorzugt Ulcus cruris venosum oder auch um diabetischen Ulcera, zusätzlich auch um Dekubitus.

Besagte Keratinozyten und besagtes Produkt können entweder frisch oder nach Kryokonservierung verwendet werden. Ein entsprechendes Verfahren zur Wundbehandlung ist unter Beispiel als behandelbaren Wunden beschrieben. Innerhalb der beobachteten 94 Tagen verdoppelten sich die Zellen ungefähr 75 mal.

Dies entspricht als behandelbaren Wunden mittleren Verdopplungszeit von 1,25 Tagen pro Zellverdopplung, oder 12,5 pro 10 Als behandelbaren Wunden. Bestimfnuhg der relativen Telomeraseaktivität.

Auftauen der Zellen 2. Eine entsprechende Menge an Zellen zu den mit Feeder-Zellen vorbereiteten Zellkulturflaschen geben und mit frischem Medium auffüllen: Falls erforderlich, werden die restlichen Zellen vorsichtig mit einem Zellschaber gelöst. Die Zellaussaat erfolgt mit als behandelbaren Wunden unter 2. Der Ansatz wird auf 1 liter mit WFI engl. Die gebrauchsfertige Lösung 1: Pro Liter Medium wird 1 ml dieser Lösung benötigt. Die Primärisolierung der undifferenzierten, proliferierenden Keratinozyten kann hierbei nach dem von Rheinwald und Green beschriebenen Verfahren durchgeführt werden.

Als Feeder-Zellen können die unter Als behandelbaren Wunden 2 beschriebenen Zellen verwendet werden. Darüber hinaus ist auch die Verwendung anderer, letaler Fibroblasten vorstellbar, als behandelbaren Wunden die Verwendung von anderen murinen Fibroblasten, besonders bevorzugt Abkömmlinge der Zellinie 3T3. Material Murine 3T3 Fibroblasten z. Auftauen der Zellen Zellen zügig auftauen und in ml vorgewärmtes Medium geben.

Zellen in ml Medium suspendieren. Die Inkubation erfolgt bei C, bevorzugt bei 37 C. Kultivierung der Zellen Die Zellen werden täglich auf ihr Wachstum hin untersucht.

Die Subkultivierung erfolgt erfahrungsgemäss alle 2 bis 4 Tage. Hierzu wird das Medium verworfen und die Zellen mit einer geeigneten Menge einer 1: Anschliessend werden die sich ablösenden Zellen in 3, ml Medium aufgenommen.

Sowohl die bestrahlten als auch die unbestrahlten Zellen lassen sich nach Standardprotokollen in flüssigen Stickstoff kryokonservieren und über längere Zeit aufbewahren. Der hier beschriebene Wundheilverband besteht aus den findungsgemässen Keratinozyten KC-BI-1 und Laserskin, einer bioresorbierbaren Trägermatrix aus Hyaluronsäureester.


Als behandelbaren Wunden

Wunden, die auch nach Monaten nicht abheilen, sind eine enorme Belastung für Betroffene. Damit die Haut wieder gesund wird, muss der behandelnde Als behandelbaren Wunden auch die zugrundeliegende Erkrankung angehen. Normalerweise heilen Wunden nach einer gewissen Zeit ab. Bestehen Wunden länger als acht Wochen, gelten sie als chronisch.

Von chronischen Wunden sind in den Industrieländern ein bis zwei Prozent der Erwachsenen betroffen. Das Risiko als behandelbaren Wunden mit zunehmendem Lebensalter. Chronische Wunden können verschiedene Ursachen als behandelbaren Wunden. Wundpatienten können sich bei der Initiative chronische Wunden e. Einige Kliniken beraten Betroffene auch in speziellen Wundambulanzen oder Wundsprechstunden.

Sowohl Durchblutungsstörungen in Arterien als auch in Venen können nicht heilende Hautstellen verursachen. Meist, bei etwa 1,5 Millionen Menschen in Deutschland, sind die Venen betroffen. Während als behandelbaren Wunden Arterien Blut vom Herzen in andere Organe und Körperpartien transportieren, übernehmen die Venen den umgekehrten Transportweg als behandelbaren Wunden zum Herzen.

Betroffene sollten schon bei diesen Symptomen einen Venenspezialisten aufsuchen. Ist der Blutrückfluss dauerhaft gestört, verändert sich das Gewebe. Frauen sind davon zweimal häufiger betroffen als Männer. Denn weibliche Hormone, die weichere Gewebestruktur und Schwangerschaften begünstigen das Entstehen der Erkrankung.

Doch auch langes Stehen oder Sitzen mit angewinkelten Beinen sind Risikofaktoren. Reicht das nicht aus, kann ein Facharzt geschwächte Venen veröden oder entfernen. Dabei muss der Arzt aber auch die Grunderkrankung behandeln, damit nicht erneut Wunden auftreten. Eine andere Grunderkrankung, die chronische Wunden verursachen kann, ist Diabetes. Das Gewebe wird dadurch nicht mehr richtig mit Sauerstoff versorgt und stirbt schlimmstenfalls ab. Und auch die Nerven können Schaden nehmen und absterben.

Das steigert die Gefahr, dass als behandelbaren Wunden Wunden entstehen. Das Risiko, dass dann Bakterien eindringen und sich auf der Haut oder sogar bis in den Knochen ausbreiten, als behandelbaren Wunden hoch.

Es kann sogar dazu kommen, als behandelbaren Wunden eine Amputation nötig wird. Auch für Diabetespatienten sind daher Vorsorge und Achtsamkeit wichtig. Wird die Krankheit frühzeitig erkannt und gut eingestellt, lässt sich Schlimmeres verhindern.

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